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Abkürzungsverzeichnis V 1Einleitung1 1.1Tumorentstehung und -progression1 1.2Der Prozess der Metastasierung4 1.2.1Epithelial-mesenchymale Transition4 1.3Brustkrebs7 1.3.1Histologie und Klassifizierung7 1.4Cadherine11 1.4.1Klassische Cadherine11 1.4.2VE-Cadherin13 1.4.3N-Cadherin14 2Fragestellung16 3Material und Methoden18 3.1Material18 3.1.1Geräte18 3.1.2Verbrauchsmaterialien20 3.1.3Chemikalien, Reagenzien, Enzyme und Kits22 3.1.4Puffer, Ansätze und Gele25 3.1.5Antikörper28 3.1.6Primer29 3.1.7Zellkultur30 3.1.8Software32 3.2Methoden33 3.2.1Kultivierung der Zellen33 3.2.2Proteinisolierung und Western Blot34 3.2.3RNA-Isolierung und Polymerasekettenreaktion36 3.2.4Immunfluoreszenz40 3.2.5Untersuchung des Proliferationsverhaltens41 3.2.6Sphäroidversuch43 3.2.7Untersuchung des Migrationsverhaltens mittels Boyden-Chamber44 3.2.8Untersuchung des Migrationsverhaltens mittels in vitro Wundheilungsversuch45 3.2.9Untersuchung des Invasionsverhaltens46 3.2.10Statistische Analyse49 4Ergebnisse50 4.1Charakterisierung der N-Cadherin defizienten Klone50 4.1.1Untersuchung der E-, N- und VE-Cadherin-Expression auf mRNA-Ebene mittels RT-PCR und q-PCR53 4.1.2Untersuchung der E-, N- und VE-Cadherin-Expression auf Proteinebene mittels Western Blot56 4.1.3Untersuchung der E-, N- und VE-Cadherin-Expression und -Lokalisation mittels Immunfluoreszenzfärbung57 4.2Einfluss des N-Cadherin auf das Proliferationsverhalten61 4.3Einfluss des N-Cadherin auf die Sphäroidbildung62 4.4Einfluss des N-Cadherin auf das Migrationsverhalten64 4.5Einfluss des N-Cadherin auf das Invasionsverhalten69 5Diskussion71 5.1N-Cadherin-Defizienz hat keinen Einfluss auf die Expression und subzelluläre Lokalisation von E-Cadherin in der humanen Mammakarzinomzelllinie SUM149PT72 5.2N-Cadherin-Defizienz führt zu deutlicher Herabregulierung der VE-Cadherin-Expression in der humanen Mammakarzinomzelllinie SUM149PT73 5.3N-Cadherin-Defizienz hat keinen Einfluss auf die Proliferation der humanen Mammakarzinomzelllinie SUM149PT74 5.4N-Cadherin-Defizienz hat keinen Einfluss auf die Sphäroidbildung der humanen Mammakarzinomzelllinie SUM149PT74 5.5N-Cadherin-Defizienz führt zu signifikant verringerter Migration der humanen Mammakarzinomzelllinie SUM149PT75 5.6N-Cadherin-Defizienz führt zu signifikant verringerter Invasion der humanen Mammakarzinomzelllinie SUM149PT76 6Zusammenfassung79 7Abbildungsverzeichnis83 8Tabellenverzeichnis84 9Literaturverzeichnis85 10Danksagung104 |
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Kienel, Anna Sophia, Die Rolle des N-Cadherin im Mammakarzinom, txt, nc, Online-Ausg. 2016 Online-Ressource (Text) Saechsische Landesbibliothek- Staats- und Universitaetsbibliothek Dresden, Dissertation Technische Universität Dresden 2015, Abkürzungsverzeichnis V 1Einleitung1 1.1Tumorentstehung und -progression1 1.2Der Prozess der Metastasierung4 1.2.1Epithelial-mesenchymale Transition4 1.3Brustkrebs7 1.3.1Histologie und Klassifizierung7 1.4Cadherine11 1.4.1Klassische Cadherine11 1.4.2VE-Cadherin13 1.4.3N-Cadherin14 2Fragestellung16 3Material und Methoden18 3.1Material18 3.1.1Geräte18 3.1.2Verbrauchsmaterialien20 3.1.3Chemikalien, Reagenzien, Enzyme und Kits22 3.1.4Puffer, Ansätze und Gele25 3.1.5Antikörper28 3.1.6Primer29 3.1.7Zellkultur30 3.1.8Software32 3.2Methoden33 3.2.1Kultivierung der Zellen33 3.2.2Proteinisolierung und Western Blot34 3.2.3RNA-Isolierung und Polymerasekettenreaktion36 3.2.4Immunfluoreszenz40 3.2.5Untersuchung des Proliferationsverhaltens41 3.2.6Sphäroidversuch43 3.2.7Untersuchung des Migrationsverhaltens mittels Boyden-Chamber44 3.2.8Untersuchung des Migrationsverhaltens mittels in vitro Wundheilungsversuch45 3.2.9Untersuchung des Invasionsverhaltens46 3.2.10Statistische Analyse49 4Ergebnisse50 4.1Charakterisierung der N-Cadherin defizienten Klone50 4.1.1Untersuchung der E-, N- und VE-Cadherin-Expression auf mRNA-Ebene mittels RT-PCR und q-PCR53 4.1.2Untersuchung der E-, N- und VE-Cadherin-Expression auf Proteinebene mittels Western Blot56 4.1.3Untersuchung der E-, N- und VE-Cadherin-Expression und -Lokalisation mittels Immunfluoreszenzfärbung57 4.2Einfluss des N-Cadherin auf das Proliferationsverhalten61 4.3Einfluss des N-Cadherin auf die Sphäroidbildung62 4.4Einfluss des N-Cadherin auf das Migrationsverhalten64 4.5Einfluss des N-Cadherin auf das Invasionsverhalten69 5Diskussion71 5.1N-Cadherin-Defizienz hat keinen Einfluss auf die Expression und subzelluläre Lokalisation von E-Cadherin in der humanen Mammakarzinomzelllinie SUM149PT72 5.2N-Cadherin-Defizienz führt zu deutlicher Herabregulierung der VE-Cadherin-Expression in der humanen Mammakarzinomzelllinie SUM149PT73 5.3N-Cadherin-Defizienz hat keinen Einfluss auf die Proliferation der humanen Mammakarzinomzelllinie SUM149PT74 5.4N-Cadherin-Defizienz hat keinen Einfluss auf die Sphäroidbildung der humanen Mammakarzinomzelllinie SUM149PT74 5.5N-Cadherin-Defizienz führt zu signifikant verringerter Migration der humanen Mammakarzinomzelllinie SUM149PT75 5.6N-Cadherin-Defizienz führt zu signifikant verringerter Invasion der humanen Mammakarzinomzelllinie SUM149PT76 6Zusammenfassung79 7Abbildungsverzeichnis83 8Tabellenverzeichnis84 9Literaturverzeichnis85 10Danksagung104, N-Cadherin, Mammakarzinom, Brustkrebs, Emt, Breast Cancer, Hochschulschrift gnd-content, Breier, Georg, Morawietz, Henning, text/html https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bsz:14-qucosa-205022 Online-Zugriff |
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